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問： 現(xiàn)在剛剛開始做干細胞，想自己計數(shù)白細胞，用的是Sigma的0.4%臺盼藍，1:1混合，從2分鐘開始細胞死亡越來越多，例如2分時有10%死亡，到5分鐘就死一半了，到底是幾分鐘計數(shù)*準確呢？& 還有一個問題，看到有1:1使用，也有1:9的，用哪種濃度呢？

答1 ：0.4%應該是1:1混合的，1:9的是4%濃度的，這個染色的時間不應該太長的，因為對于胎盤藍這種大分子，不能滲透就如細胞膜，但是如果染色時間過長，會因為胞吞作用進入細胞里，所以時間長了之后看到很多細胞都是藍色，不一定是細胞死了，可能是臺盼藍進去了，我們一般混合一下就在顯微鏡下看了，要是死細胞，細胞膜有破裂，細胞很快就藍了。

答2： 采用細胞計數(shù)儀計數(shù)，這樣可以快速有效的將單位體積的總細胞數(shù)、活細胞數(shù)、死細胞數(shù)及細胞活性直接讀出，如果用目測法只能將細胞總數(shù)大致估計出。

答3 ： 3分鐘內觀察，是和細胞混一下就滴出來觀察，大于3分鐘活細胞也會被染上不準的

答4 ： 臺盼藍母液是0.4%， 用的時候1:10稀釋使用（1:1使用的話細胞受不了的），5分鐘之內數(shù)完。
還有就是評判細胞的死活時，染成藍色或者鏡下不透亮的細胞都是死細胞！

答5： 混合后要在3分鐘內計數(shù)完畢，要不然細胞死的越來越多，結果不準。如果時間上來不及的話，可以先在顯微鏡下拍照再計數(shù)。

原創(chuàng)作者：上海遠慕生物科技有限公司