技術(shù)文獻(xiàn)
問(wèn)：我養(yǎng)的是RAW264.7細(xì)胞，不知道為什么長(zhǎng)得這么快？而且消化也很容易，好像和園子里其他養(yǎng)RAW細(xì)胞的很不一樣。一般傳代（1傳2）后大概16－20個(gè)小時(shí)左右就能夠長(zhǎng)到90％，請(qǐng)問(wèn)是應(yīng)該一定等到24小時(shí)再傳代，還是可以等長(zhǎng)到90％（<24小時(shí)）如果沒(méi)到24小時(shí)就傳代的話，會(huì)對(duì)細(xì)胞狀態(tài)有影響么？
答：很多試驗(yàn)中要求分盤后24h時(shí)再開(kāi)始實(shí)驗(yàn)（如轉(zhuǎn)染），除了讓細(xì)胞充分貼壁，還有一個(gè)重要原因就是使細(xì)胞達(dá)到正常代謝水平。從你的描述來(lái)看，如果細(xì)胞貼壁還比較快的話，個(gè)人認(rèn)為可以進(jìn)行傳代，若細(xì)胞密度過(guò)高達(dá)接觸抑制，細(xì)胞比較容易老化。
還有建議傳代時(shí)采用更低一些的稀釋度（1:3或者更低）。 感覺(jué)1:2太高了，建議到ATCC上查找一下，會(huì)找到*佳的subcultivation ratio。以便保證細(xì)胞的*佳狀態(tài)，不要舍不得扔細(xì)胞，subculture的時(shí)候把細(xì)胞全用上，你的細(xì)胞長(zhǎng)得快，頻繁的subculture，細(xì)胞不但不能優(yōu)化還可能會(huì)發(fā)生變異。
問(wèn)：請(qǐng)問(wèn)1:2太高了是什么意思��？是不是要1:3以上傳代呢？因?yàn)槿绻麄鞯锰×�，�?xì)胞長(zhǎng)起來(lái)比較慢，可能有群集效應(yīng)。所以一般每天傳代，到底傳代頻繁是能夠改善細(xì)胞狀態(tài)還是像你所說(shuō)得會(huì)造成變異呢？
答：剛幫你查下：RAW 264.7，Subcultivation ratio: A subcultivation ratio of 1:3 to 1:6 is recommended。Medium renewal: Replace or add medium every 2 to 3 days。所以說(shuō)你1：2傳太高了，是這個(gè)意思。建議加大傳代比率，1：3或1：4傳。反復(fù)傳代勞命傷財(cái)，對(duì)細(xì)胞也有害，特別是細(xì)胞未到24h。細(xì)胞傳代的比率要適當(dāng)。細(xì)胞太少，生長(zhǎng)慢，因細(xì)胞生長(zhǎng)需相互間有信號(hào)傳導(dǎo)。
細(xì)胞太多，也不好，因細(xì)胞太多會(huì)有“接觸抑制”。我也從ATCC上看過(guò)這個(gè)，不過(guò)由于我們養(yǎng)的細(xì)胞不可能和他們的條件完全一樣，所以對(duì)于傳代就不可能完全按照它們說(shuō)的。不過(guò)看來(lái)還是有一定的道理哦�，F(xiàn)在覺(jué)得，其實(shí)1：3傳代可能更適合現(xiàn)在的細(xì)胞生長(zhǎng)速度，長(zhǎng)得太快太慢了，細(xì)胞都擠的變圓了。細(xì)胞太少的時(shí)候會(huì)抑制它們的生長(zhǎng)速度。
問(wèn)：請(qǐng)教一下，為什么細(xì)胞太少的時(shí)候會(huì)抑制它們的生長(zhǎng)速度呢？
答：細(xì)胞生長(zhǎng)需要一定的輔因子，而這些不僅要求血清供給，還有細(xì)胞在培養(yǎng)過(guò)程中生成的，若細(xì)胞太少，會(huì)導(dǎo)致這類因子不足。有時(shí)候會(huì)在培養(yǎng)細(xì)胞時(shí)候，放一些伴生長(zhǎng)細(xì)胞是這個(gè)原因，好像叫保姆細(xì)胞。我養(yǎng)的是骨肉瘤細(xì)胞，生長(zhǎng)速度也很快。
我一般等長(zhǎng)滿了就傳代，不是特別關(guān)注時(shí)間。你在傳代分瓶的時(shí)候多分幾瓶。但也不能太多，因?yàn)榧?xì)胞太少的時(shí)候會(huì)抑制它們的生長(zhǎng)速度。看是什么細(xì)胞了，如是生長(zhǎng)比較旺盛的細(xì)胞，只要貼壁情況良好就可以傳。我培養(yǎng)的是hela細(xì)胞。復(fù)蘇后不到24小時(shí)的換液以后，過(guò)了-6小時(shí)就可以傳代了。但是好像對(duì)其他多數(shù)細(xì)胞建議還是24小時(shí)后傳。
原創(chuàng)作者：上海遠(yuǎn)慕生物科技有限公司
相關(guān)推薦產(chǎn)品
請(qǐng)輸入要搜索的關(guān)鍵詞
上海遠(yuǎn)慕生物科技有限公司：細(xì)胞凍存液,氨芐青霉素溶液,人白介素ELISA試劑盒,大鼠ELISA試劑盒,小鼠ELISA試劑盒,顯色試劑盒,新生牛血清,標(biāo)準(zhǔn)胎牛血清,牛血清白蛋白溶液,小鼠血漿,雞紅細(xì)胞,透明質(zhì)酸酶溶液,微生物培養(yǎng)基,胰蛋白酶儲(chǔ)存液,兩性霉素B溶液,LB冷凍緩沖液,ABTS試劑,磷酸酶抑制劑,EB緩沖液,熒光染色試劑盒,肥大細(xì)胞染色液,人源基因質(zhì)粒,胡蔓藤堿乙標(biāo)準(zhǔn)品,番茄紅素標(biāo)準(zhǔn)品，Pd-C-II標(biāo)準(zhǔn)品,知母皂苷E標(biāo)準(zhǔn)品,穿刺培養(yǎng)基,puc19質(zhì)粒,CPD抗凝劑,熒光抗體稀釋液
地址：上海市嘉定區(qū)曹安公路5588號(hào) 電話：021-58999639 傳真：021-58999639 技術(shù)支持：阿儀網(wǎng) 總訪問(wèn)量：7644581
客服一
