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我國(guó)現(xiàn)行真菌毒素檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)概述
閱讀次數(shù):1082 發(fā)布時(shí)間:2021/8/9 11:08:08
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  1 真菌毒素標(biāo)準(zhǔn)的發(fā)展

真菌毒素是產(chǎn)毒真菌在糧食(或果蔬)的種植、收獲、運(yùn)輸、儲(chǔ)存過(guò)程中侵染糧食(或果蔬),并在適宜的生長(zhǎng)條件下產(chǎn)生的次生代謝產(chǎn)物。真菌毒素污染谷物、飼料、果蔬,通過(guò)食物鏈危害人類(lèi)健康和畜禽生產(chǎn)安全。因此,衛(wèi)生組織(World Health Organization,WHO)和聯(lián)合國(guó)糧農(nóng)組織(Food and Agriculture Organization,F(xiàn)AO)把真菌毒素列為食源性疾病的三大根源之shou。我國(guó)是真菌毒素污染嚴(yán)重的國(guó)家。

目,人們發(fā)現(xiàn)的真菌毒素有400多種。我國(guó)重點(diǎn)關(guān)注黃曲霉毒素(主要是Aflatoxin B1,AFB1和Aflatoxin M1,AFM1)、脫氧雪腐鐮刀菌烯醇(Deoxynivalenol,DON)、玉米赤霉烯酮(Zearale,ZEN)、赭曲霉毒素(Ochratoxin A,OTA)、展青毒素(Patulin,Pat)、T-2毒素(T-2 toxin,T2)和伏馬毒素(Fumonisins,F(xiàn)Bs)等,這些毒素具有強(qiáng)毒性和高污染頻率等特點(diǎn),每種毒素的化學(xué)結(jié)構(gòu)、生物毒性及適宜生長(zhǎng)的基質(zhì)不同;有些毒素會(huì)在飼用動(dòng)物體內(nèi)發(fā)生結(jié)構(gòu)轉(zhuǎn)化,以結(jié)構(gòu)類(lèi)似物存在動(dòng)物源性食品中,危害人類(lèi)健康。包括我國(guó)在內(nèi)的許多國(guó)家都制定了真菌毒素的限量標(biāo)準(zhǔn),這些限量標(biāo)準(zhǔn)是非關(guān)稅壁壘的重要組成部分,也是保障我國(guó)食品安全和畜牧業(yè)健康發(fā)展的需要。

黃曲霉毒素M1結(jié)構(gòu)式

從“十五”到“十二五”,國(guó)家重點(diǎn)關(guān)注農(nóng)、獸藥等外源性有毒有害物質(zhì)污染,對(duì)真菌毒素的重視較晚,相關(guān)檢測(cè)技術(shù)的研究起步也晚。國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)委員會(huì)曾提出在標(biāo)準(zhǔn)制定中采用標(biāo)準(zhǔn)和國(guó)外先-進(jìn)技術(shù)、積與接軌的要求,促使我國(guó)真菌毒素檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)的制修訂得到了充分的發(fā)展。一些標(biāo)準(zhǔn)制定借鑒了國(guó)外先-進(jìn)的檢測(cè)技術(shù),這在一定程度上為我國(guó)國(guó)有品牌樹(shù)立了biao桿和發(fā)展方向。

經(jīng)過(guò)十多年的發(fā)展,我國(guó)制定了一系列的真菌毒素相關(guān)標(biāo)準(zhǔn),但還需要在檢測(cè)技術(shù)、作用毒理、公共危害等域得到加強(qiáng)的基礎(chǔ)上逐步改進(jìn)和豐富。研究人員曾對(duì)我國(guó)真菌毒素的檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行探討,但那些被討論過(guò)的標(biāo)準(zhǔn)很多已被廢止,側(cè)面反映了近些年來(lái)我國(guó)真菌毒素標(biāo)準(zhǔn)制定的活躍和國(guó)家的重視。

真菌毒素標(biāo)準(zhǔn)包括限量標(biāo)準(zhǔn)和檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)。按照檢測(cè)方法,可分為大型儀器方法和快速檢測(cè)方法;按照適用范圍,可分為食品類(lèi)、原糧類(lèi)和飼料類(lèi)。本文對(duì)我國(guó)現(xiàn)行真菌毒素檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行了梳理、闡述和分析,根據(jù)筆者對(duì)真菌毒素檢測(cè)技術(shù)的了解,對(duì)各類(lèi)標(biāo)準(zhǔn)涉及的技術(shù)進(jìn)行思考和探討,并從應(yīng)用和市場(chǎng)角度提出了一些建議和意見(jiàn),希望能為我國(guó)真菌毒素標(biāo)準(zhǔn)的發(fā)展提供有益的參考。

2 我國(guó)現(xiàn)行的食品中真菌毒素的標(biāo)準(zhǔn)

現(xiàn)行的食品安全國(guó)家限量標(biāo)準(zhǔn)GB 2761-2017《食品中真菌毒素限量》,屬?lài)?guó)家強(qiáng)制執(zhí)行的標(biāo)準(zhǔn)。GB 2761包括限定的毒素種類(lèi)、限量、食品類(lèi)型及檢驗(yàn)方法的標(biāo)準(zhǔn)。早的GB 2761是1981年頒布實(shí)施的,先后經(jīng)過(guò)四次修訂。1981年版只規(guī)定了AFB1的限量和食品種類(lèi);2005年版增加了AFM1、DON、Pat;2011版又增加了OTA、ZEN。2017版沒(méi)有增加毒素種類(lèi),但對(duì)食品類(lèi)型的劃分更加細(xì)致。該標(biāo)準(zhǔn)沒(méi)有做出受飼料行業(yè)監(jiān)管、污染原糧的FBs、T-2的限定。GB 2761的修訂,反映了國(guó)家對(duì)食品真菌毒素污染的重視。下邊將對(duì)每種真菌毒素的現(xiàn)行檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)逐一闡述和分析:

2.1 黃曲霉毒素(AF)

AF是產(chǎn)毒真菌黃曲霉和寄生曲霉產(chǎn)生的次代謝產(chǎn)物,是毒性強(qiáng)的化學(xué)致癌物質(zhì)。目分離鑒定出的AF包括AFB1、AFB2、AFG1、AFG2、AFM1和AFM2等18種。1993年癌癥研究所將AF確定為一人類(lèi)致癌物。熱帶和亞熱帶地區(qū)農(nóng)作物易遭受AF污染,居民肝癌發(fā)病率較高。

GB 276l-2017規(guī)定了食品中AFB1/M1的-大限量標(biāo)準(zhǔn)及其存在的食品類(lèi)別:谷物及其制品、豆類(lèi)及其制品、堅(jiān)果及籽類(lèi)、油脂及其制品、調(diào)味品、特殊膳食用食品等6大類(lèi)18小類(lèi),限量范圍為0.5~20 μg/kg,其中特殊膳食用食品的限量di。AFM1限量的食品類(lèi)別分為乳及乳制品、特殊膳食用食品等2大類(lèi)8小類(lèi),統(tǒng)一限量0.5 μg/kg。GB 276l-2017的限量明顯比GB 13078-2017《飼料衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)》嚴(yán)格,但低于歐盟食品的限量要求。

AF的檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)(見(jiàn)表1)包括國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)(GB)、糧油行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)(LS)、農(nóng)業(yè)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)(NY)、出入境檢驗(yàn)檢疫行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)(SN)、地方標(biāo)準(zhǔn)(DB)及食藥局快檢標(biāo)準(zhǔn)(KJ)等,涵蓋了真菌毒素檢測(cè)的所有方法。涉及的檢測(cè)方法有柱后光化學(xué)衍生高-效液相色譜法、超高-效液相色譜法、免疫親和柱凈化-高-效液相色譜法、同位素內(nèi)標(biāo)-液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法、高-效液相色譜-柱衍生法等儀器分析方法和膠體金定量/定性檢測(cè)技術(shù)、酶聯(lián)免疫吸附篩查法、時(shí)間分辯熒光定量檢測(cè)技術(shù)、雙流向酶聯(lián)免疫法、薄層色譜法、免疫親和層析凈化熒光光度法等快檢方法。

一種作物可能被多種真菌毒素污染,因此對(duì)多種真菌毒素同時(shí)檢測(cè)的技術(shù)很有實(shí)際應(yīng)用價(jià)值。剛剛實(shí)施的LS/T 6133-2018《主要谷物中16種真菌毒素的測(cè)定 液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法》采用穩(wěn)定同位素內(nèi)標(biāo)液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法,對(duì)谷物中多種毒素同時(shí)檢測(cè),該技術(shù)除了檢測(cè)我國(guó)日常監(jiān)管的毒素外,還可以檢測(cè)其衍生物或結(jié)構(gòu)類(lèi)似物。

快檢方法不僅僅是對(duì)實(shí)驗(yàn)室方法的有益補(bǔ)充,根據(jù)2015年頒布的《食品安全法》,國(guó)家認(rèn)-可的快檢方法可以作為執(zhí)-法依據(jù)。農(nóng)業(yè)部、國(guó)家糧食局和國(guó)家食藥總局先后頒布了8個(gè)免疫檢測(cè)技術(shù)的標(biāo)準(zhǔn)。糧食行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)率-先將膠體金定量檢測(cè)技術(shù)納入標(biāo)準(zhǔn)中,之膠體金免疫層析技術(shù)只是作為定性篩查的手段。2017年國(guó)家食藥局頒布了三個(gè)真菌毒素快檢標(biāo)準(zhǔn),其中兩個(gè)是AF的標(biāo)準(zhǔn)。這些都為免疫層析技術(shù)在農(nóng)業(yè)、糧油、食藥行業(yè)的應(yīng)用提供了技術(shù)保障和標(biāo)準(zhǔn)支撐,同時(shí)也有效保障了這些域AF的監(jiān)管和檢測(cè)。唯1寫(xiě)入GB或GB/T的免疫方法是市場(chǎng)應(yīng)用劇減的酶聯(lián)免疫,目應(yīng)用廣泛的免疫層析技術(shù)只出現(xiàn)在行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)中。

全球有100多個(gè)國(guó)家和地區(qū)制訂了食品和飼料中AF限量標(biāo)準(zhǔn)。我國(guó)對(duì)食品中AFB1和AFM1的-高允許量有嚴(yán)格規(guī)定,而美國(guó)、加-拿-大等國(guó)家主要對(duì)AF總量(B1+B2+G1+G2)做出限定。為了滿(mǎn)足進(jìn)出口的需求,SN標(biāo)準(zhǔn)是針對(duì)黃曲霉毒素總量的檢測(cè)。

黃曲霉毒素的檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)覆蓋了AF污染的大多數(shù)食品,2020年《中國(guó)藥典》2351真菌毒素測(cè)定法,更是增加了藥材、飲片及中藥制劑中真菌毒素的檢測(cè)。但是,一些過(guò)時(shí)檢測(cè)技術(shù)的行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)依然有效:如NY/T 1664-2008《牛乳中黃曲霉毒素的快速檢測(cè) 雙流向酶聯(lián)免疫法》,該技術(shù)操作繁瑣,業(yè)性要求高,且只能定性檢測(cè),市面上已很難買(mǎi)到相應(yīng)的檢測(cè)試劑。薄層色譜法是一種處理復(fù)雜、當(dāng)應(yīng)用很少的檢測(cè)技術(shù),依然作為第五法寫(xiě)入GB 5009.22-2016中。編者建議廢止不能適應(yīng)市場(chǎng)需要的一些標(biāo)準(zhǔn)。

2.2 脫氧雪腐鐮刀菌烯醇(DON)

脫氧雪腐鐮刀菌烯醇又稱(chēng)為嘔吐毒素,廣泛存在玉米、小麥、大麥等谷物中,是污染食物的主要真菌毒素。DON破壞人和動(dòng)物免疫系統(tǒng),具有一定的胚胎毒性和致畸性。各國(guó)都對(duì)食品中DON做出了限量要求。GB 276l-2017規(guī)定谷物及其制品中DON的限量是1000 μg/kg,與美國(guó)對(duì)小麥的限量標(biāo)準(zhǔn)一致。而歐盟標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的非常細(xì)致:未加工的硬質(zhì)小麥、谷物和玉米中DON的限量為1750 μg/kg,未加工的谷物(除述之外的谷物)的DON限量是1250 μg/kg,終端銷(xiāo)售的谷物面粉、麩皮和胚芽的DON限量為750 μg/kg,谷物為原料的嬰兒食品中DON限量不得超過(guò)200 μg/kg;日本規(guī)定小麥和小麥制品的DON限定量為1100 μg/kg。

DON的檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)有9個(gè)(見(jiàn)表2),包括4個(gè)LS,1個(gè)KJ,3個(gè)GB和1個(gè)SN,其中GB 5009.111-2016《食品中脫氧雪腐鐮刀菌烯醇及其乙;苌锏臏y(cè)定》是GB 2761-2017zhi定的檢驗(yàn)方法,可以檢測(cè)谷物及其制品、酒類(lèi)、醬油、醋中的DON及其乙;苌。與AF相比,DON檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)的數(shù)量和方法明顯減少,但DON作為糧食行業(yè)重點(diǎn)關(guān)注的毒素,LS占比非常大。DON的結(jié)構(gòu)類(lèi)似物雪腐鐮刀菌烯醇(NIV)對(duì)我國(guó)中東部作物的污染較常見(jiàn),但目只有DB32/T 3205-2017《飼料中雪腐鐮刀菌烯醇(NIV)的測(cè)定 免疫親和柱凈化-高-效液相色譜法》提出了它的檢測(cè)方法。

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