大腸菌群測定標準取樣原則、常見問題
閱讀次數(shù)：709 發(fā)布時間：2022/1/18 10:07:37
大腸菌群MPN法
1、取樣原則：本標準中對應(yīng)的檢樣量分別為0.1g（mL）、0.01g（mL）、0.001g（mL），根據(jù)樣品限量值，查閱附錄部分MPN表：
（1）無論固體或液體，當(dāng)限量值為“＜3.0”或其它任意能在標準“表1”中查到的數(shù)值，則分別取1mL 1：10的樣品勻液接種到3管單料LST肉湯管、分別取1mL 1：100的樣品勻液接種到3管單料LST肉湯管、分別取1mL 1：1000的樣品勻液接種到3管單料LST肉湯管；
（2）無論固體或液體樣品的限量值為“＜0.3”或其它任意為MPN表中查到的數(shù)值縮小10倍的數(shù)值，則分別取10mL樣品1:10稀釋液接種到3管雙料LST肉湯管、分別取1mL 1：10的樣品勻液接種到3管單料LST肉湯管、分別取1mL 1：100的樣品勻液接種到3管單料LST肉湯管（如蜂蜜的限量值為0.3MPN/g，即采取此做法）。
2、凡產(chǎn)酸或產(chǎn)氣的LST管，都取1環(huán)接種GBLB肉湯管，凡BGLG產(chǎn)氣者記為陽性。
大腸菌群平板計數(shù)法（常見問題匯總）
1、VRBA培養(yǎng)相關(guān)問題
（1）所用器皿是否需要滅菌？
答：不需要。配制培養(yǎng)基所用到的錐形瓶、玻璃棒、勺子等均不需要滅菌，但要求一定要清洗干凈，表面無污漬、無殘留。煮沸完成后，取下錐形瓶，用一般常用的衛(wèi)生紙（軟紙）覆蓋瓶口，用橡皮筋纏繞，待冷卻至適宜溫度即可傾注培養(yǎng)基。在傾注培養(yǎng)基時，須點燃酒精燈，稍微灼燒錐形瓶口。
（2）如何保持“煮沸2min”？
答：可以用電磁爐或電熱板進行加熱煮沸，在該培養(yǎng)基即將煮沸時調(diào)低溫度。實際操作時，不需要嚴格按照此要求進行，加熱煮沸數(shù)即可。原因：本培養(yǎng)基很難保持煮沸2min，一旦煮沸，則培養(yǎng)基很快上涌、翻騰，若不調(diào)低溫度或立刻采取其他措施，則培養(yǎng)基可在數(shù)內(nèi)噴涌出來，嚴重者可噴涌2米以上、電磁爐周圍1—2米范圍內(nèi)都是培養(yǎng)基飛濺的范圍（實驗室危險因子）。
（3）若培養(yǎng)基未用完，是否可以冷藏起來下次用？
答：不可以。4789.28中已規(guī)定，固體培養(yǎng)基多允許熔融1次（指的是經(jīng)過高壓滅菌冷卻后的培養(yǎng)基還可以熔融一次后使用）。且VRBA培養(yǎng)基冷卻后，再次熔融時非常容易噴涌，若溫度控制不當(dāng)，底部培養(yǎng)基熔融后很快就會發(fā)生噴涌（即培養(yǎng)基未完全熔融就會發(fā)生噴涌現(xiàn)象）。
（4）傾注完成后是否需要“覆蓋一層”？如何覆蓋？
答：一般情況下不需要覆蓋。在實際操作過程中，若檢驗員初次接觸該食品（或食品品類），則有必要在傾注培養(yǎng)基后再覆蓋一層（原因是不清楚該樣品是否會發(fā)生蔓延）。而如此往復(fù)測試幾次后，若該樣品或食品品類均不存在蔓延現(xiàn)象，則以后的實驗中都不需要進行覆蓋。若重復(fù)多次測試后都有蔓延現(xiàn)象，則以后的檢驗中好都進行覆蓋，好是在原培養(yǎng)基已凝固或半凝固（不會發(fā)生晃動）時再傾注一層培養(yǎng)基（“一層”是指緩慢傾注培養(yǎng)基至培養(yǎng)基剛好能夠覆蓋整個平皿）。
2、如何確定培養(yǎng)基上長的是不是大腸菌群？
答：建議新手們認真按照標準進行證實試驗，此證實試驗簡單易操作，每一次VRBA上有菌落生長都進行證實試驗，如此往復(fù)3-4次，對于哪種形態(tài)才是大腸菌群已經(jīng)能夠了然于心。
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